如果起始物质的点逐渐变淡，而产物的点逐渐变浓，并且没有杂质点出现，这表明反应仅产生了目标产物而没有生成杂质，此时可以继续实验，直至起始物质点完全消失或不再变淡为止反之，若起始物质的点逐渐变淡，而产物和杂质的点同时逐渐变浓，且杂质与产物的Rf值相差不大，则通常需要立即停止反应尽管我。

1解离常数pKa的测定通常涉及对具有荧光的物质溶液的浓度进行变化，观察不同浓度下溶液的荧光强度变化，通过这些变化来确定物质的解离常数2解离平衡常数测定时，将等量的待测物质点样到经过不同pH值缓冲溶液处理过的薄层色板上，然后在同一溶剂系统中展开通过测量得到的一系列Rf值迁移率。

通过Rf与分配系数公式我们知道Rf与分配系数流动相与固定相的体积有关，由于体积比在同一实验条件下是常数，所以Rf只与分配系数有关而分配系数取决于氨基酸的极性基团，而碳链的影响则对Rf影响甚微由于氨基酸 侧链基团极性不同，自然Rf不同 氨基酸极性越大Rf越小。

分离出的物质在纸层析图谱上的位置可以通过比移值Rf来确定，Rf值定义为从原点至氨基酸停留点中心的距离X与原点至溶剂前沿的距离Y的比值Rf值在特定条件下对某种物质而言是恒定的，这一特性使得它成为鉴定和定量分析氨基酸的重要工具Rf值的大小受到多种因素的影响，包括物质的结构和性质。

而极性较小的氨基酸如甘氨酸和丙氨酸，由于其侧链基团的极性较弱，与固定相的相互作用较少，因此Rf值较大此外，氨基酸的侧链基团的化学性质和大小也会影响其在分配层析中的行为，从而影响Rf值值得注意的是，虽然碳链长度对Rf的影响相对较小，但某些特定情况下，如长碳链氨基酸，碳链的长度也可能对Rf。